Modyfikacja fosforylacji
Badania nad fosforylowanymi białkami i peptydami mogą pomóc ludziom wyjaśnić mechanizm powyższego procesu i lepiej zrozumieć naturę czynności życiowych. W ostatnich latach, wraz z ciągłym rozwojem technologii proteomicznej, badania fosforylacji białek cieszą się coraz większym zainteresowaniem. Wiele naturalnych toksyn i patogenów wywiera również swoje działanie poprzez zmianę stanu fosforylacji białek wewnątrzkomórkowych.
Fosforylowane polipeptydy odnoszą się głównie do Ser, Tyr i Thr. Grupa hydroksylowa łańcucha bocznego reszty jest modyfikowana do polipeptydu kwaśnego fosforanu. Jak dotąd modyfikacja fosforylacji polipeptydów obejmuje głównie metodę post-fosforylacji i dwie metody syntezy:
W przypadku modyfikacji metodą monomerową fosforylowany aminokwas jest trudny do kondensacji z łańcuchem peptydowym ze względu na zawadę przestrzenną powodowaną przez większą grupę modyfikującą łańcuch boczny, a późniejsze wprowadzenie aminokwasu będzie trudniejsze. Zwłaszcza gdy zawiera wiele modyfikacji miejsc fosforylacji, synteza stanie się niezwykle trudna, a produkt końcowy ma złożone składniki, jest trudny do oddzielenia i ma wyjątkowo niską wydajność. Dlatego też, gdy fosforylacji ulega wiele miejsc w łańcuchu peptydowym, można rozważyć metodę post-fosforylacji. Główny proces syntezy polega na selektywnym usunięciu grup zabezpieczających łańcuchy boczne aminokwasów, które mają być znakowane, po zakończeniu syntezy polipeptydu. W przypadku Tyr, Thr Aminokwasy z niezabezpieczonymi łańcuchami bocznymi można zastosować bezpośrednio w reakcji. Grupa zabezpieczająca łańcuch boczny w stężeniu 1% TFA/DCM. Można ją usunąć ilościowo pod pewnymi warunkami. Podczas post-fosforylacji można zastosować bisbenzylofosforoamidyn. Tetrazol wytwarza aktywny związek pośredni, fosforoamidyno-tetrazol, który jest połączony z grupą hydroksylową, a następnie utleniany w warunkach nadtlenowych, aby wytworzyć grupę fosforylową w celu zakończenia reakcji.
- Świadczymy usługi modyfikacji fosforylacji pSer, pTyr, pThr i D-pSer, D-pTyr, D-pThr.
- Modyfikacje fosforylacji 2 miejsc, 3 miejsc, 4 miejsc i 5 miejsc można przeprowadzić jednocześnie.
Fosforylowane peptydy. Przypadek syntetyczny (Thr(HPO3), Tyr(HPO3), Ser(HPO3) czekaj)
1. W sekwencji znajdują się 4 miejsca fosforylacji (xxxpSpTxxxpSxxxpTx). Czystość wynosi 95%, a cykl zakończenia trwa 3 tygodnie.
